No teste ELISA, o que os anticorpos primários e os anticorpos secundários fazem?

No teste ELISA, o que os anticorpos primários e os anticorpos secundários fazem?
Anonim

Responda:

Isso depende do tipo de ensaio ELISA.

Explicação:

ELISA Ensaio de Imunoadsorção Enzimática.

Existem diferentes tipos de ensaios ELISA. O que você precisa é:

  • anticorpo com uma enzima ligada a ele
  • antígeno ao qual o anticorpo se liga
  • substrato da enzima que provoca uma reação mensurável

o enzima ligado ao anticorpo é frequentemente HRP (peroxidase de rábano). O HRP pode reagir com diferentes substratos que mudam de cor ou emitem luz, ambos mensuráveis.

A imagem mostra uma visão geral do tipos diferentes de ensaios de ELISA. Vou explicar como eles funcionam abaixo.

ELISA direto

Uma placa é revestida com o antígeno (Ag) e um anticorpo primário com enzima é adicionado. Quando o substrato é adicionado, a reação ocorrerá e é proporcional à quantidade de interações anticorpo-antígeno.

ELISA indireto

Mais uma vez, uma placa é revestida com o antígeno e uma anticorpo primário liga-se ao antígeno. UMA anticorpo secundário é adicionado que se liga ao primeiro anticorpo. O segundo anticorpo contém a enzima que reage com o substrato.

ELISA sanduíche

Aqui dois ou três anticorpos estão envolvidos. Um anticorpo de captura é ligado a placas e se liga ao antígeno. Isto é seguido pelos mesmos passos que o método direto (apenas um anticorpo) ou indireto (dois anticorpos).

ELISA competitivo

Às vezes chamado de ELISA de inibição, é um pouco mais complicado. Uma placa é revestida com o antígeno a ser pesquisado. UMA anticorpo primário com a enzima é primeiro incubada com uma amostra com uma concentração desconhecida do mesmo antigénio. Isso é então adicionado à placa, permitindo que os anticorpos que ainda estão livres reajam com o antígeno na placa. Após os complexos anticorpo-antígeno da amostra serem lavados, o substrato é adicionado.

Quando a amostra desconhecida tem muito antígeno, haverá menos anticorpos livres para se ligar ao sinal placa = menor.