O que é a troca iônica de cromatografia? + Exemplo

O que é a troca iônica de cromatografia? + Exemplo
Anonim

Responda:

É um processo para separar diferentes proteínas com base em suas propriedades de carga e ligação a um material.

Explicação:

Em diferentes pHs, diferentes proteínas carregam cargas diferentes. Ao colocar uma mistura de proteínas em um pH definido, você pode ter uma mistura que contém proteínas com diferentes propriedades de carga.

Se esta mistura de proteínas é vertida para uma coluna que contém um material com uma carga sobre ela, a coluna ligará proteínas dentro da carga oposta.

Você pode então usar diferentes soluções contendo quantidades diferentes de íons para eluir (descolar) as proteínas da coluna.

Por exemplo, digamos que você tenha uma mistura de proteínas da qual você deseja purificar uma determinada proteína. Se você soubesse que em um determinado pH sua proteína de interesse era carregada positivamente, você poderia despejar a mistura em uma coluna que contivesse material carregado negativamente.

Todas as proteínas que não carregavam uma carga, ou quando carregadas negativamente, fluíam diretamente pela coluna. Você poderia então liberar sua proteína positivamente carregada inundando a coluna com íons positivos que completariam a carga negativa na coluna. Esta competição então faria com que sua proteína de interesse fosse eluída.

Aqui está um exemplo disso acontecendo.

Cada bandeja contém um tampão em uma concentração diferente e, como pode ser visto na amostra de 175 mM (canto superior esquerdo), muito pouca proteína vermelho / marrom se ligou à membrana carregada, pois há competição entre os íons no tampão eo proteína para os sítios de ligação carregados na membrana (Os íons no buffer "venceram" porque há mais deles e assim eles evitaram que a proteína se ligasse). Na amostra no canto inferior direito, muita proteína se ligou à membrana porque há menos íons presentes para competir pelos sítios de ligação.

Neste vídeo você pode ver a cromatografia de troca aniônica em operação: