Por que usamos um controle negativo em PCR?

Por que usamos um controle negativo em PCR?
Anonim

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Explicação:

PCR funciona fora de um modelo de DNA. Vamos dizer que você está testando para o HIV (o HIV é um vírus de RNA, mas quando entra em uma célula, ele se transforma em DNA … então haverá DNA de HIV em uma célula infectada). Os primers que você usar produzirão um produto (amplicon) que corresponde a parte do DNA do HIV. Se você ver este amplicon, então você tem a seqüência do HIV presente ….. mas se você não tiver um controle negativo, você pode ter contaminação.

PCR é extremamente sensível. Existem muitas soluções usadas em PCR (água, tampão, dNTPs, enzima) … e todas elas podem facilmente ser contaminadas com DNA de outras amostras, ou até mesmo do amplicon que foi feito na reação que você fez ontem. Portanto, se você tiver uma amostra de DNA do Paciente X e verificar o HIV por PCR, os iniciadores de PCR podem produzir um produto fora do DNA do HIV na amostra de DNA do Paciente X (se essa pessoa tiver o HIV), ou pode contaminação. Mas você não pode dizer se é de contaminação ou de HIV no DNA do paciente.

Então você corre um controle de água. Tubo 1 você coloca todos os componentes da reação, e para o DNA você só adiciona água. Este é o controle negativo. NADA deveria amplificar aqui. No Tubo 2 você coloca todos os componentes da reação e o DNA do Paciente X. Se você receber um produto aqui (e nada no Tubo 1), o Paciente X provavelmente tem o DNA do HIV em seu DNA. Se você obtiver um produto no Tubo 1 e Tubo 2, você tem um problema de contaminação e você não pode dizer se o HIV na amostra do Paciente é da doença ou de contaminação.

Então você sempre executa um controle de água (água no lugar do DNA).