Por que o GAPDH é usado no Western Blot? + Exemplo

Por que o GAPDH é usado no Western Blot? + Exemplo
Anonim

Responda:

O GAPDH é frequentemente usado como controle de carregamento.

Explicação:

Em Western blotting, usamos frequentemente o GAPDH como controle de carregamento. O que isto significa é que, ao sondar o GAPDH, podemos verificar que temos quantidades equivalentes de proteínas carregadas em diferentes pistas do blot.

Um exemplo de uso - digamos que temos uma doença que achamos que provoca uma elevação de uma proteína específica na célula. Faríamos uma amostra de células "saudáveis" e outra amostra de células "doentes". Em seguida, carregaríamos quantidades equivalentes de proteína de ambas as amostras em um gel para o Western blot.

Depois de sondar a mancha para nossa proteína de interesse, descobrimos que nas células doentes o nível de proteína é realmente elevado (ou seja, uma faixa mais escura é produzida no blot). Para provar que este aumento na proteína é devido a uma mudança de expressão na célula, em vez de um artefato de carga (isto é, a banda mais instancia é causada por uma mudança na expressão da proteína nas células, e não por nós carregando acidentalmente mais da amostra "doença" do que a "saudável") também sondaríamos o blot para GAPDH para mostrar que os níveis de proteína total são os mesmos em ambas as faixas.

Assim, ao fazer isso, estamos mostrando que a proteína equivalente foi carregada nas duas pistas e que a mudança na intensidade da banda que estamos observando é devida a mudanças na expressão da proteína para a proteína de interesse.