Responda:
Normalmente, este é um teste de especificidade de anticorpos.
Explicação:
Em um ELISA, é muito difícil dizer se o seu anticorpo está se ligando à sua proteína de interesse, uma proteína completamente diferente ou uma variedade de proteínas.
O Western blot será usado para verificar a especificidade do anticorpo (você deve observar que o Western blot pode não detectar todas as reações cruzadas com proteínas incorretas).
No Western Blot, você pode ver o tamanho da proteína à qual o anticorpo está se ligando (você não pode em um ELISA). Portanto, por exemplo, se o seu anticorpo deve ser ligado a uma proteína de 56 kDa e você vê uma faixa de aproximadamente 56 kDa no blot, então você pode estar razoavelmente seguro de que o anticorpo está ligado à proteína correta.
Se, por outro lado, você visse uma banda a 32 kDa, poderia concluir que o anticorpo está ligado à proteína errada. Da mesma forma, se muitas bandas aparecessem no Western blot, então isso sugeriria (na ausência de degradação proteica) que o anticorpo se ligasse a uma gama de proteínas diferentes.
No exemplo da banda de 32 kDa que aparece no gel, e também nas bandas múltiplas, sugere-se que o anticorpo não tem especificidade para o ELISA e que quaisquer resultados observados no ELISA podem não ser específicos para a proteína de interesse.
Se eu fiz esse tipo de teste, posso incluir algum tipo de reagente "interferente" para testar o anticorpo. Por exemplo, se eu tivesse criado meu anticorpo para um peptídeo, eu poderia incluir o peptídeo na solução de anticorpo primário para testar a ligação correta. Ou seja, na presen do ptido, n dever ver qualquer banda ou nenhum resultado do ELISA, uma vez que o meu anticorpo primio seria incapaz de se ligar devido presen de um excesso do ptido.
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