Responda:
Para purificar a fração de proteína …
Explicação:
Se você está purificando uma proteína (muitas vezes específica), você precisará se livrar de tanto lixo quanto puder, que pode estar vinculado a eles.
Depende de uma medida em que proteína você está depois, mas geralmente é uma boa idéia, especialmente em preparativo purificação, para se livrar de tantas impurezas quanto possível.
1:
Como as proteínas geralmente são grandes e, conseqüentemente, aparecerão nas bandas mais baixas da sua fração (ultracentrifugada), você quer se livrar de quaisquer ácidos nucléicos, especialmente se a proteína que você está purificando diz respeito a gostos de Pol1, Transcriptase reversa ou qualquer outra enzima envolvida na Replicação / Transcrição / Tradução.
Você pode separar os ácidos nucleicos presentes na amostra usando uma DNAse: isso irá hidrolisar totalmente o DNA em suas partes constituintes.
Lembre-se, existem vários DNAse, todos diferentes em seu mecanismo e especificidade para seu substrato. Dependendo da DNAse usada, ela pode mostrar Endo- ou Exo atividade de nuclease …
Mais ao ponto, RNAse é mais adequado, pois o RNA é geralmente mais dentro da faixa de flutuação / fração de proteínas, e pode ser ligado à proteína.
2:
Lisozima: Uma enzima que tem pelo menos duas funções:
Ele desglicosilados enzimas: A maioria das proteínas transportadas na corrente sangüínea são glicosiladas: elas têm algumas moléculas de açúcar ligadas a elas. A lisozima removerá os resíduos de açúcar.
Também tem a capacidade de quebrar a parede celular das bactérias Gram-positivas, levando-as a lisar. (se você quiser purificar proteínas de bactérias Gram-positivas)
Quaisquer produtos degradados, seja ácido nucléico ou restos de açúcar, aparecerão nas frações superiores do Tubo Centrífugo devido à sua flutuabilidade "mais leve" ….
Açúcar e farinha são misturados na proporção 3: 5 em uma receita doce. Em outra receita, 15 partes de farinha são usadas. Se estes dois ingredientes em ambas as receitas estiverem em uma proporção equivalente, quantas partes de açúcar devem ser usadas?
A resposta é 9 Açúcar e relação de sabor 3: 5 nova mistura usada 15 unidades de sabor 5xx3 = 15 unidades, portanto, para manter proporção mesmo multiplicar proporção de açúcar com o mesmo número 3xx3 = 9
Quais são alguns exemplos de métodos de purificação de proteínas?
Filtragem de Membrana por Diálise de Precipitação Se você conhece o ponto isoelétrico da proteína, pode precipitar e filtrar ou centrifugar a fração protéica por ajuste de pH. As proteínas são moléculas razoavelmente grandes e a diálise ou a filtração por membrana podem ser usadas para remover impurezas que passarão facilmente através dos poros de uma membrana enquanto retêm a fração protéica.
Por que os detergentes são necessários para extrair proteínas integrais da membrana, mas não proteínas da membrana periférica?
Proteínas extrínsecas ou periféricas são mantidas frouxamente na membrana, sua remoção é fácil. Eles podem ser removidos simplesmente alterando o pH. As proteínas intrínsecas estão profundamente embebidas na membrana, portanto, para sua isloação, são necessários detergentes.