Por que as enzimas de restrição são mantidas em solução de glicerol a 50%?

Por que as enzimas de restrição são mantidas em solução de glicerol a 50%?
Anonim

Responda:

Para mantê-los intactos …

Explicação:

Restrição Enzimas são usadas em quantidades muito pequenas, mas geralmente são compradas em lotes ligeiramente maiores.

Se por nada mais, você geralmente prefere fazer testes diferentes com o mesmo lote. O lote comprado precisa, portanto, ser armazenado por um longo período.

A maioria das enzimas é perfeitamente feliz em seu buffer a 4 graus Celsius por um tempo, mas acabará por se degradar. 24 horas é geralmente o limite aceito.

Para armazenamento a longo prazo, o lote deve ser congelado. -20C é o padrão, e vai mantê-lo por vários meses. Para períodos ainda mais longos (por exemplo, um ou mais anos) -70C é a norma.

É necessário congelá-lo rapidamente e em pequenos recipientes (por exemplo, Eppendorfs) para evitar o descongelamento / recongelamento com muita freqüência.

Para evitar danos à proteína a temperaturas tão baixas, estabilizadores podem / devem ser adicionados, tais como TDT (Di-Tio-Treitol), albumina sérica e, mais importante, Glicerol (5-50%)

Estranhamente, a -20C é necessário usar 50% glicerol, enquanto a -70 glicerol não é realmente necessário, embora a adição dele possa ajudar a estabilizar a proteína ….