Responda:
Muitos…
Explicação:
Existem muitas razões pelas quais as bandas podem não aparecer em um western blot. As combinações de amostra e anticorpo funcionaram no passado?
Abaixo estão alguns que eu posso pensar no momento que podem fazer com que as bandas não apareçam:
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A proteína foi transferida do gel? Tente manchar a membrana com algo como ponceau S ou amido black para ver se as bandas estão presentes. Às vezes, você pode ver as bandas de proteína na membrana molhando-a e mantendo-a em um ângulo com a luz.
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O anticorpo primário está funcionando? Este é um teste difícil de testar e a única maneira que você pode é incluir um controle positivo onde você sabe que tem a proteína de interesse presente. Se você tiver alguma proteína interessada, tente localizá-la na membrana Western blotting (ou seja, não use o gel) e veja se obtém um resultado se processar a membrana como se fosse um western blot.
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O anticorpo secundário está reconhecendo o anticorpo primário? Mais uma vez, difícil de testar. Sobre o único teste que você pode fazer é o teste no local mencionado acima em 2.
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O "sistema de detecção" está funcionando? Dependendo do método de detecção que você está usando, você pode tentar usar um pouco do anticorpo secundário para ver se a solução de detecção, e também o agente desencadeante / enzima do anticorpo secundário, está funcionando. Isto é, você pode desencadear a reação apenas com o anticorpo secundário?
Finalmente, pode ser tão simples quanto uma das soluções usadas durante a sondagem da plotagem ser feita incorretamente. Por exemplo, se a concentração de sal estiver errada no tampão, isso pode fazer com que os anticorpos sejam liberados do blot. O mesmo aconteceria também se o pH dos buffers estivesse incorreto.
A causa "mais estranha" para um western blot que não funcionou, que eu pessoalmente experimentei, foi quando trocamos o fornecedor do leite em pó que usávamos para bloquear a membrana. O pó do novo fornecedor continha uma fosfatase fosfotirosina que removeu todos os grupos fosfato que estávamos tentando detectar com nosso anticorpo antifosfotirosina.
Jake, Lionel e Wayne trabalham como pintores da Paint Well Company. Jake pode pintar 1 quarto em t horas. Lionel pode pintar uma sala 2 horas mais rápido do que Jake pode. Wayne pode pintar 2 quartos em 3 vezes o número de horas que Lionel leva para pintar 1 quarto?
12/7 horas para pintar 1 quarto se todos trabalharem em conjunto cor (vermelho) ("Você definiu a taxa de trabalho mas não indicou o número de quartos" cor (vermelho) ("a ser pintada. Eu vou resolver isso por 1 quarto e você terá que "cor (vermelho) (" proporção isto para cima (ou para baixo) para quantos quartos são necessários. ") Para 1 quarto apenas: Jake -> 1xxt" horas de sala "Lional-> 1xx (t-2 ) "horas de sala" Wayne-> 1xx (3 (t-2)) / 2 "horas de sala" larr "2 quartos em" 3 (t-2) '~~~~~~~~~~
Nick pode jogar uma bola de beisebol com mais de 4 vezes o número de pés, f, que Jeff pode jogar a bola de beisebol. Qual é a expressão que pode ser usada para encontrar o número de pés que Nick pode lançar a bola?
4f +3 Dado que, o número de pés que Jeff pode jogar a bola de beisebol pode Nick jogar uma bola de beisebol três mais de 4 vezes o número de pés. 4 vezes o número de pés = 4f e mais três do que isso será 4f + 3 Se o número de vezes que Nick pode jogar a bola é dado por x, então, A expressão que pode ser usada para encontrar o número de pés que Nick pode jogue a bola será: x = 4f +3
Odell imprime e vende cartazes por US $ 20 cada. A cada mês, 1 pôster é impresso incorretamente e não pode ser vendido. Como você escreve uma equação linear que representa a quantia total que a Odell ganha a cada mês levando em conta o valor do cartaz que não pode ser vendido?
Y = 20x-20 Seja x o número de cartazes que ele vende a cada mês. Já que cada pôster é de US $ 20, y = 20x (US $ 20 * o número de pôsteres vendidos) No entanto, temos que subtrair um pôster. Sabemos que 1 pôster é $ 20, portanto = 20x-20 (y é o valor total que a Odell ganha mensalmente, levando em conta o valor do cartaz que não pode ser vendido)